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快速革兰染色法的改良
发布时间:2020
项目名称 快速革兰染色法的改良
项目类型 创新训练项目
学科类别 医学——医学技术类
项目编号 S202010542092
立项年份 2020
联系QQ号 1546148318
项目组成员 姓 名 年 级 专 业 是否主持人
张蓉2018年级医学检验技术第一主持人
王磊2018年级医学检验技术
唐小涵2018年级医学检验技术
王馨语2018年级医学检验技术
张雅惠2018年级医学检验技术
指导教师 姓 名 职 称 研究方向
钟志宏 高级实验师
学术成果

在湖南师范大学学报(医学版)2022年02期发表了论文——一种快速两步革兰染色法的建立。文章编号为 ISSN1673-016X 。

[摘要]目的:通过对革兰染色液配方的改良,建立一种快速两步革兰染色法。方法:配制多种两步法革兰染色液,不断优化染色时间,建立一种快速两步革兰染色法,然后将其与临床快速四步革兰染色法染色结果进行比较。结果:两步法 A 液 15s、B 液 10s 染色效果好,分别用两步法、四步法各染 100 张涂片,其中两步法合格率为94%,四步法为87%。以合格率计算,二者结果经统计学分析无明显差异,两步法可以达到与现有临床快速四步法相同的染色效果。结论:本研究建立的两步革兰氏法能满足临床工作需要,可以用于临床。

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项目简介 革兰氏染色是细菌学中很重要的鉴别染色法,此法利用细菌细胞壁性质的不同,将细菌分成阳性与阴性两类。经典革兰氏染色法分为初染、媒染、脱色、复染四步进行。我们采用改变媒染剂成分、染色剂配比及染色时间等方式进行改良,缩短染色步骤及时长,使三步法各步骤的时间确定在一个时间段内,降低出错率。同时尝试只用两步就能显著区分革兰氏阳性菌与阴性菌,并通过大量临床实践使染液能应用于临床,从而达到提高染色效率的目的。
项目特色与创新

两步革兰染色法减少了操作步骤、大大缩短了时间、影响因素也少,染色一个样本只需要1-2分钟,快速两步革兰染色法更是将一个样本染色时间降到了半分钟左右,为临床微生物学检验工作人员节省出大量时间,而且大大减少了影响因素,更容易控制染色质量,对于初学者也很容易掌握。

创新特色:尝试通过改变染液、染色时间来改良快速革兰染色法,尝试了一步法、二步法、三步法,并在不同菌种中实验比较,最后建立了一种快速两步革兰染色法。


项目成果

建立了一种以自配的结晶紫和草酸铵为主要成分的A液与以丙酮、吡咯烷酮碘、品红为主要成分的B液进行的两步法,发现两步法按照传统方法的染色时间,即A液1min、B液30s最不易过染,快速染色A液15s、B液10s或A液10s、B液5s均可同时保证染色效率和染色质量,但A液15s、B液10s效果更好。对于部分阳性菌,A液10s、B液5s有时会出现部分视野被染成红色的现象,可能是脱色过度而导致的假阴性。将两步法与贝索公司生产的革兰染色液(快速法)使用的四步法进行比较,两种方法合格率的比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果发现两步革兰染色法与四步法染色结果无统计学差异,两步法染色结果能达到目前临床应用的快速四步革兰染色法一致的染色效果。对于部分细菌两步法染色色泽较四步法稍淡,不如四步法鲜明,但还是阴阳性明显,能满足临床工作需求,因此这种快速两步革兰染色法可以用于临床。并在湖南师范大学学报(医学版)2022年第02期发表论文《一种快速两步革兰染色法的建立》。

研究心得

革兰氏染色是细菌形态学染色检查法中最基本、应用最广泛的染色方法,它将细菌分为两大类即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,其染色机制有等电点学说、物理吸附等作用,在整个染色过程中,由于受各种因素的影响,其结果常常不尽人意,且四步法步骤繁琐,所以我们建立了一种可以区分革兰阳性菌和革兰阴性菌的快速两步革兰染色法,减少了革兰染色的步骤并缩短了所用时间,大大提高了操作效率。最终完成了一篇论文《一种快速两步革兰染色法的建立》。在项目进行期间,我们进行了大量实验并查阅了很多文献,再加上老师的指导,小组成员对于革兰染色的理解更加深入,同时实验也增强了组员的动手能力。

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